Pauline was Mario's vriendin toen Mario nog op de normale aarde leefde.
Mario begon een klein circus en als grootste attractie had hij een grote levende aap: Cranky Kong, de vader van Donkey Kong. Cranky hekelde Mario en zijn gevangenschap en wist te ontsnappen. Uit wraak nam hij Pauline met zich mee. In het spel Donkey Kong kidnapte Donkey Kong Pauline en was het aan Mario om haar te redden. Mario, die toen nog Jumpman heette, sloeg hier uiteindelijk in. Nadat Mario via een warp in het Mushroom Kingdom belandde, verwaterde zijn vriendschap met Pauline. Mario heeft uiteindelijk gekozen voor Princess Peach. Pauline is – voor zover bekend – nog steeds vrijgezel, maar dit is niet het geval in de Mario vs. Donkey Kongserie. Hier kidnapt Donkey Kong Pauline, en ook steelt Donkey Kong de Mini-Mario toys. Het is aan Mario om Pauline en de Mini-Mario's te redden. Uiteindelijk slaagt Mario hierin, en worden Mario en Donkey Kong weer vrienden.
Pauline heeft lange kastanjebruine haren, lichtblauwe ogen en is vaak gehuld in een rode galajurk.